01/产品介绍

本试剂盒基于硅基磁珠特异性吸附DNA的原理，酶解法释放血液基因组，特定高效裂解缓冲体系中结合DNA分子，改变环境离子强度，从而实现基因组DNA分离纯化。可从100-250ul血液样本中高效提取基因组，获得的基因组DNA适用于PCR反应、酶切反应及Southern杂交等下游实验。

02/产品优势

1. 无需酚或氯仿等有毒试剂

2. 同时兼容新鲜，冷冻及抗凝血样本（EDTA抗凝、肝素抗凝及柠檬酸盐抗凝）

3. 操作简便快捷，质量好

03/产品内容

04/保存条件

室温保存1年有效。

05/自备试剂

异丙醇，无水乙醇

06/质检实例

对以下样本进行DNA纯化: 200 μl EDTA、EDTANaF、肝素钠、柠檬酸钠等不同处理的人抗凝血、2 ml血液分离出的白膜层、10 μl鸡血和200 μl鼠血，M: TIANGEN Marker D15000。 洗脱体积均为100 μl ,琼脂糖凝胶电泳上样量为4μl。

实验结果分析: 本试剂盒具有广泛的样品适用性，可对不同处理的人抗凝血及不同物种的血 液进行高质量的 DNA 提取。

07/注意事项

1. 初次使用前，请向BufferW1和BufferW2中加入相应体积的无水乙醇。

2. 每次使用前摇匀各瓶中溶液，使体系均一，保证提取效果。

3. 溶液放置一段时间后若产生沉淀，可37℃水浴溶解，不影响效果。

4. 使用无菌离心管和枪头，避免外源核酸酶污染。

5. 血液样品反复冻融，会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融，以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA，建议37℃水浴，迅速解冻后再进行后续操作。

6. 血液样品的储存：
   1)短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在2～8℃储存最多10天，对于某些实验例 如Southern杂交等，需要得到完整全长的基因组DNA，请将血液样品在2～8℃储存不超过3天，此时基因组DNA的降解程度较轻。
   2)长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存(如果提取的是高分子量的DNA，推荐使用EDTA作为抗凝剂)。

08/使用方法

1. 取100-250ul血液于1.5ml洁净离心管中。

2. 向其中加入300ul Buffer KA和20ul Proteinase K，漩涡混匀30s。

3. 68℃孵育（水浴和金属浴均可）10min，每间隔2-3min漩涡混匀5s。

4. 加入200ul异丙醇漩涡混匀20s，加入20ul磁珠悬液（注意：加入前漩涡混匀磁珠悬液）。

5. 漩涡混匀30s min，静置1min。

6. 重复操作步骤5两次。

7. 转移离心管置于磁力架上，进行磁分离后，小心吸去液体（注意：不要吸走磁珠）。

8. 从磁力架上取下离心管，加入800ul Buffer W1，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

9. 重复操作步骤8一次。

10. 从磁力架上取下离心管，加入600ul Buffer W2，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

11. 重复操作步骤10一次。

12. 转移离心管于磁力架上，室温晾干8-10min（注意：晾干时间不可超过10分钟，否则会影响基因组质量）。

13. 取下离心管，加入100-200ul Buffer TE，用移液枪吹吸混匀20次，65℃孵育8 min，期间吹吸混匀2次。

14. 转移离心管置于磁力架上，进行磁分离，转移除磁珠以外的液体于新的离心管中，-20℃保存。

09/常见问题及应对策略

◆获得的基因组DNA纯度低

1. 建议增加Buffer W1和Buffer W2洗脱用量100ul。

2. 选用新鲜血液样本进行提取。

3. 洗涤过程中，磁珠未被充分打散，有蛋白聚集，建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间。

4. 用Buffer TE洗脱前未充分晾干，有少量乙醇残留。

◆获得的基因组DNA浓度低

1. 建议更换新鲜的样本进行提取。

2. 减少Buffer TE的用量，或延长65℃孵育时间至15min。

3. 洗脱过程中，磁珠未充分磁分离就转移液体，造成磁珠损失。

4. 加大磁珠10ul，以增加吸附力度，从而增大得率。

5. 晾干时间超过10分钟，磁珠太过于干燥，洗脱效率下降。

6. 用Buffer TE洗脱过程中未充分打散磁珠团块，造成基因组释放不充分。

◆提取过程中出现磁珠结团现象

在磁珠法提取过程中，由于大量染色质核酸吸附在磁珠表面，绝大多数情况下会出现磁珠结团的现象。此现象可作为核酸含量的判别指标，一般来说，有结团说明样本良好，吸附过程顺利高效，只要操作者在洗涤和洗脱过程中，充分打散团块就可得到理想的基因组DNA分子。