01/产品介绍

本试剂盒基于硅基磁珠特异性吸附DNA的原理，酶解法释放血液基因组，特定高效裂解缓冲体系中结合DNA分子，改变环境离子强度，从而实现基因组DNA分离纯化。适合从唾液或者口腔拭子中高效提取最高50kb基因组DNA，优良的缓冲体系，可最大程度去除唾液中的糖胺聚糖和粘性蛋白等杂质，获得的基因组DNA适用于PCR反应、酶切反应、文库构建及Southern杂交等下游实验。既可以操作者手动操作，也适用于高通量自动化操作。

02/产品优势

1. 操作过程安全无毒

2. 同时兼容唾液和咽鼻拭子样品基因组提取

3. 操作简便快捷，质量好

4. 适用于手提和高通量

03/产品内容

04/保存条件

室温保存1年有效。

05/自备试剂

异丙醇，无水乙醇

06/注意事项

1. 初次使用前，请向BufferSW1和BufferSW2中加入相应体积的无水乙醇。

2. 每次使用前摇匀各瓶中溶液，使体系均一，保证提取效果。

3. 样品应避免反复冻融（一般不超过3次），否则会降低提取质量。

4. 溶液放置一段时间后若产生沉淀，可37℃水浴溶解，不影响效果。

5. 使用无菌离心管和枪头，避免外源核酸酶污染。

07/使用方法

1. 取500ul唾液于1.5ml洁净离心管中。

2. 向其中加入300ul Buffer KB和20ul Proteinase K，漩涡混匀30s。

3. 68℃孵育（水浴和金属浴均可）10min，每间隔2-3min漩涡混匀5s。

4. 加入200ul异丙醇漩涡混匀20s（注意：此时可能有结块现象，一定要充分打散），加入20ul磁珠悬液（注意：加入前漩涡混匀磁珠悬液）。

5. 漩涡混匀30s min，静置1min。

6. 重复操作步骤5两次。

7. 转移离心管置于磁力架上，进行磁分离后，小心吸去液体（注意：不要吸走磁珠）。

8. 从磁力架上取下离心管，加入800ul Buffer SW1，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

9. 重复操作步骤8一次。

10. 从磁力架上取下离心管，加入600ul Buffer SW2，漩涡混匀2min，进行磁分离，吸去除磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

11. 重复操作步骤10一次。

12. 转移离心管于磁力架上，室温晾干8-10min（注意：晾干时间不可超过10min，否则会影响基因组质量）。

13. 取下离心管，加入50-200ul Buffer STE，用移液枪吹吸混匀20次，65℃孵育8-10 min，期间吹吸混匀2次。

14. 转移离心管置于磁力架上，进行磁分离，转移除磁珠以外的液体于新的离心管中，-20℃保存。

08/常见问题及应对策略

◆获得的基因组DNA纯度低

1. 建议增加Buffer SW1和Buffer SW2洗脱用量100ul。

2. 选用新鲜唾液样本进行提取。

3. 洗涤过程中，磁珠未被充分打散，有蛋白聚集，建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间。

4. 用Buffer STE洗脱前未充分晾干，有少量乙醇残留。

◆获得的基因组DNA浓度低

1. 建议更换新鲜的样本进行提取。

2. 减少Buffer STE的用量，或延长65℃孵育时间至15min。

3. 洗脱过程中，磁珠未充分磁分离就转移液体，造成磁珠损失。

4. 加大磁珠10ul，以增加吸附力度，从而增大得率。

5. 晾干时间超过10分钟，磁珠太过于干燥，洗脱效率下降。

6. 用Buffer STE洗脱过程中未充分打散磁珠团块，造成基因组释放不充分。