该研究以题为“Targeting mechanosensitive EphA2 phase separation to alleviate arterial stiffening”发表在Bioactive Materials上。图1. EphA2是动脉硬化的关键因素。（A） 示意图展示了ECM刚度可能产生的机械感受器，包括GPCRs、整合素、离子通道和RTKs。 （B） 假小鼠和5/6肾切除（Nx）小鼠主动脉中潜在机械感受器的差异表达mRNA热图。蓝色表示表达较低，红色表示表达较高。 （C） 主动脉内有Masson和Alizarin红色S染色。 （D） 在所指主动脉中对EphA2进行免疫荧光及EphA2强度的定量分析。L：流明。n = 7只小鼠。 （E） 西方印迹法及假小鼠和5/6 Nx小鼠主动脉中EphA2表达的定量，n=6小鼠。 （女） 上方：5/6肾切除术（Nx）诱导动脉硬化模型的示意图。下：指示组主动脉中EphA2的免疫荧光。 （G） 定量主动脉被膜介质中EphA2强度，来自上述组别。n = 7只小鼠。 （H） 对指照小鼠鞘膜培养基中Epha2表达的定量RT-PCR分析。n = 7只小鼠。 （我 以及 J) 所指小鼠主动脉和颈动脉的脉冲波速度（PWV）。n = 7只小鼠。 （K） 通过纳米凹陷测量了所指小鼠胸主动脉的弹性模量。n = 7只小鼠。 （左） 定量标注小鼠主动脉钙化沉积，归一化为μg Ca/mg蛋白。n = 6只小鼠。 （M 以及 N) 所指小鼠胸主动脉的Masson和Alizarin红色S染色。数据以SEMs平均值表示，±未配对分析 t-检验（D和E）或双因子方差分析，随后进行Tukey多重比较检验（G-L）。∗∗∗∗P < 0.0001。图2. 基质刚度促进EphA2表达和液滴形成。（A） 在2 kPa或20 kPa凝胶上培养的HASMCs中，EphA2和F-肌动蛋白的免疫荧光。 （B 以及 C) EphA2凝聚态数量及EphA2强度的量化 （A）.数据采用了曼-惠特尼测试。 （D） 采用西方印迹法检测在2 kPa或20 kPa凝胶上培养的HASMC中EphA2表达。 （E） EphA2表达（相对于β-管蛋白）的定量 （D）.n = 6个生物复制。数据由未配对者分析 t——测试。 （女） 上层：在2 kPa kPa凝胶上植入的HASMCs中，对EphA2和脂筏蛋白卡沃林-1进行免疫荧光染色。中间：在20 kPa凝胶上植入的HASMCs中，对EphA2和早期内体标记Rab5A进行免疫荧光染色。下半段：在20 kPa凝胶上植入的HASMCs中EGFP-EphA2和LysoTracker Red的活细胞成像。 （G） 表达EGFP-EphA2的HASMCs的活细胞成像。HASMCs在20 kPa凝胶上播种。EphA2 凝聚聚变和裂变事件，如框中所示。 （H） HASMCs中EGFP-EphA2凝聚液的光漂白分析图像。HASMCs在20 kPa凝胶上播种。 （一） EGFP-EphA2凝聚物漂白区荧光强度（FI）恢复的定量化。n = 9个生物复制。 （J） 游细胞相分离分析显示EGFP-EphA2在不同浓度下液滴形成.（K） 10 μM EGFP-EphA2在5% 1,6-己二醇处理前后形成的液滴代表性荧光显微镜图像。 （左） EGFP-EphA2（10微米）的FRAP分析。 （男） 量化漂白区域的荧光强度。n = 9个生物复制。数据以SEMs的平均值表示±。∗∗∗∗P < 0.0001。

总结

本研究揭示了一种由基质硬度诱导的液-液相分离机制在血管平滑肌细胞机械转导中的关键作用。通过构建5/6肾切除诱导的动脉硬化小鼠模型，并结合聚丙烯酰胺水凝胶与可原位硬化水凝胶体系，发现基质硬度增加可显著上调EphA2表达，并促使其在细胞质中形成具有液态特征的凝聚体。该相分离过程不依赖配体结合域，主要由跨膜区介导。进一步通过免疫共沉淀与质谱分析，证实EphA2凝聚体可募集并激活ERK1/2，形成信号枢纽，进而磷酸化CREB并上调核受体NR4A3表达，最终驱动血管平滑肌细胞表型转换、增殖及钙化。NR4A3还可反向促进EphA2转录，形成正反馈环路，放大病理效应。

基于上述机制，研究设计了靶向EphA2跨膜区内在无序区域的逆向反转干扰肽，并通过VAPG修饰的脂质纳米颗粒实现血管平滑肌细胞靶向递送。在5/6肾切除小鼠模型中，该策略显著抑制了EphA2凝聚体形成，阻断下游ERK1/2-CREB-NR4A3信号轴，有效降低动脉脉搏波速度、弹性模量及胶原与钙盐沉积，改善血管僵硬度。此外，在慢性肾病、腹主动脉瘤及晚期动脉粥样硬化患者血管组织中亦观察到EphA2凝聚体的存在，且血浆EphA2水平与动脉僵硬度呈正相关，提示该机制具有临床相关性。本研究首次将液-液相分离引入血管机械转导领域，为动脉硬化及相关血管疾病的靶向干预提供了新思路。

参考消息：

DOI: 10.1016/j.bioactmat.2026.01.020