01/产品介绍

本试剂盒基于硅基磁珠特异性吸附DNA的原理，化学法和酶解法联合释放粪便基因组，搭配特殊研制的缓冲体系，高效除去多糖类、脂类、酸类、消化酶类及胆红素等杂质，可从0.25-5g体积的粪便样本中稳定提取基因组DNA分子，获得的基因组DNA适用于常规PCR反应、qPCR反应、酶切反应及检测等下游实验。

02/产品优势

1. 无需酚或氯仿等有毒试剂

2. 兼容手动及高通量操作

3. 操作简便快捷，质量稳定

03/产品内容

04/保存条件

室温保存1年有效。

05/自备试剂

异丙醇，无水乙醇

06/注意事项

1. 初次使用前，请向Buffer FW2和Buffer FW3中加入相应体积的无水乙醇。

2. 每次使用前摇匀各瓶中溶液，使体系均一，保证提取效果。

3. 溶液放置一段时间后若产生沉淀(如Buffer KE和 Buffer KEG)，可37℃水浴溶解，不影响效果。

4. 使用无菌离心管和枪头，避免外源核酸酶污染。

5. 如果单次粪便提取量大于0.5g，可按比例扩大体系加入量和洗脱量即可。

07/使用方法

1. 取0.25-0.5g粪便于2ml洁净离心管中。

2. 向其中加入500ul Buffer KE和20ul Proteinase K，漩涡混匀30s。

3. 68℃孵育（水浴和金属浴均可）10min，每间隔2-3min漩涡混匀5s。

4. 12000rpm或13400g，室温离心3min，转移上清液于1.5ml离心管中，加300ul Buffer KEG

和200ul异丙醇及20ul磁珠悬液（注意：加入前漩涡混匀磁珠悬液）。

5. 漩涡混匀30s min，静置1min。

6. 重复操作步骤5两次。

7. 转移离心管置于磁力架上，进行磁分离后，小心吸去液体（注意：不要吸走磁珠）。

8. 从磁力架上取下离心管，加入800ul Buffer FW1，漩涡混匀30s，室温静置1min, 进行磁分离，吸去除磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

9. 从磁力架上取下离心管，加入800ul Buffer FW2，漩涡混匀30s，室温静置1min, 进行磁分离，吸去除磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

10. 从磁力架上取下离心管，加入800ul Buffer FW3，漩涡混匀30s，室温静置1min, 进行磁分离，吸去除磁珠以外的液体（注意：不要吸走磁珠）。

11. 重复操作步骤10一次。

12. 转移离心管于磁力架上，室温晾干8-10min（注意：晾干时间不可超过10分钟，否则会影响基因组质量）。

13. 取下离心管，加入50-150ul Buffer FTE，漩涡混匀30s或用移液枪吹吸混匀20次，65℃孵育8 min，期间漩涡混匀5s或吹吸混匀2次。

14. 转移离心管置于磁力架上，进行磁分离，转移除磁珠以外的液体于新的离心管中，-20℃保存。

08/常见问题及应对策略

◆获得的基因组DNA纯度低

1. 建议增加Buffer FW1和Buffer FW2洗脱用量100ul。

2. 选用新鲜粪便样本进行提取。

3. 洗涤过程中，磁珠未被充分打散，有蛋白聚集，建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间或异丙醇用量由200ul减至100ul。

4. 提取样品量不合适，可适当放大或减少

5. 用Buffer FTE洗脱前未充分晾干，有少量乙醇残留。

◆获得的基因组DNA浓度低

1. 建议更换新鲜的样本进行提取。

2. 减少Buffer FTE的用量，或延长65℃孵育时间至15min。

3. 洗脱过程中，磁珠未充分磁分离就转移液体，造成磁珠损失。

4. 加大磁珠5ul，以增加吸附力度，从而增大得率。

5. 晾干时间超过10分钟，磁珠太过于干燥，洗脱效率下降。

6. 用Buffer TE洗脱过程中未充分打散磁珠团块，造成基因组释放不充分。

◆提取过程中出现磁珠结团现象

在磁珠法提取过程中，由于大量染色质核酸吸附在磁珠表面，绝大多数情况下会出现磁珠结团的现象。此现象可作为核酸含量的判别指标，一般来说，有结团说明样本良好，吸附过程顺利高效，只要操作者在洗涤和洗脱过程中，充分打散团块就可得到理想的基因组DNA分子。