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【产品介绍】
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒是苏州北科震泽生物科技有限公司最新研制的一种细菌质粒DNA小量抽提试剂盒。本产品将磁性纳米分离技术和细菌细胞的SDS碱裂解法结合从菌体中提取高质量的质粒DNA。在离心力的作用下细胞碎片和SDS复合物沉淀下来。在一定的条件下磁珠能很好的吸附存在于上清中的质粒DNA，其他杂质如蛋白质、盐离子等通过洗涤被除去。当条件改变时，磁珠释放吸附的质粒DNA。对于高拷贝质粒，从2 ml过夜培养的菌液（OD600 = 2.0）中可以获得超过15 μg的质粒DNA。由本试剂盒抽提得到的质粒纯度高，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9之间，OD260/OD230比值大于2.0，可直接用于转化、DNA测序、PCR、基于PCR的突变、体外转录和酶切等后续实验。
【特点】
l 对于高拷贝质粒，从2 ml过夜培养菌液（OD600 = 2.0）中可获得超过15 μg的质粒DNA；
l 与同类产品相比，提取效率更高，获得质粒的纯度更高；
l 与柱式法相比，可大大减少离心次数，获得完整性更好的质粒；
l 可以同时处理多个样品，实现质粒提取的高通量化和自动化。
【保存方法及注意事项】
请将试剂盒中的Beads和RNase A置于2-8℃保存，其余试剂室温保存，有效期详见包装。
l 严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对磁珠造成不可逆的损害。
l 磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠（通常需涡旋振荡20秒）。
【试剂盒组成】
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组分 |
100次 |
保存 |
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Resuspension solution |
20 ml |
常温 |
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Lysis buffer |
20 ml |
常温 |
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Neutralization solution |
20 ml |
常温 |
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Wash buffer |
75%乙醇（用户自备） |
常温 |
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Elution buffer |
10 ml |
常温 |
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bead |
2 ml |
2-8℃ |
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RNase A |
2 ml |
2-8℃ |
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异丙醇 |
用户自备 |
常温 |
DNA浓度及纯度检测 ：（1）得到的基因组DNA片段大小与样品保存时间、操作过程中剪切力等因素有关，所得DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度和纯度。 （2）DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260=1相当于大约50ng/ul双链DNA，40ng/ul单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9，如果洗脱时使用去离子水，比值会偏低，因为pH和离子会影响吸光度，并不表示纯度低。
【操作步骤】
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分菌→ |
1) 取1~1.5 ml过夜培养的大肠杆菌于2 ml微量离心管中，4℃下9000 rpm离心0.5分钟，尽量吸干培养液；
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悬菌→ |
2) 加200 ul Resuspension solution和20ul RNaseA悬浮细菌，充分混和均匀；
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裂解→ |
3) 加200 ul Lysis buffer，盖紧管口，轻缓上下4-6次颠倒离心管以使溶液变透明、粘稠），室温静置3-5min至完全裂解。
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中和→ |
4) 加200 ul 冰预冷的Neutralization solution，盖紧离心管口后上下轻缓颠倒4-6次，加入50 ul异丙醇。
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结合→ |
5) 4 ℃下13000 rpm离心5 min，小心吸取500ul上清液至新的1.5 ml离心管（300 ul异丙醇与20 ul PuriMag bead预先在离心管中混匀）；吹打3~5次，放置5 min; 将离心管放到磁力架上静置10s，小心吸弃上清。
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洗涤→ |
6) 向离心管中加入700 ul Wash buffer，移液枪吹打混匀，将离心管放到磁力架上静置10 s，小心吸弃上清。重复该步骤一次。倒置离心管2~3 min，室温晾干5 min，让残留乙醇挥发干净，以免影响后续实验。
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洗脱→ |
7) 向离心管中加入50-100 ul Elution buffer，移液枪吹打混匀1-2 min。（Elution buffer在65-70 ℃中预热后洗脱效果更好，减小洗脱体积或多次洗脱可增大DNA浓度）将离心管放到磁力架上静置10 s，小心吸走上清液放入新离心管中，即为提取的质粒DNA，可存放于2~8 ℃，长期存放需放置于-20 ℃。 |
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